GB4789.7-2013食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)內(nèi)容是什么?百檢網(wǎng)檢測(cè)范圍廣泛，可根據(jù)客戶需求選擇合適的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)及項(xiàng)目安排檢測(cè)，全國(guó)近千家合作實(shí)驗(yàn)室，CMA/CNAS資質(zhì)齊全，可就近安排寄樣檢測(cè)。今天百檢網(wǎng)就給大家簡(jiǎn)單介紹一下GB4789.7-2013食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容。

1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中副溶血性弧菌( Vibrio parahaemolyticus)的檢驗(yàn)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中副溶血性弧菌的檢驗(yàn)。

2.設(shè)備和材料

除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:

a) 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃;

b) 冰箱:2℃～5℃、7℃～10℃;

c) 恒溫水浴箱:36℃±1℃;

d) 均質(zhì)器或無菌乳缽;

e) 天平:感量0.1g;

f) 無菌試管:18mm×180mm、15mm×100mm;

g )無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭;

h) 無菌錐形瓶:容量250mL、500mL、1000mL;

i) 無菌培養(yǎng)皿:直徑90mm；

j) 全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)；

k) 無菌手術(shù)剪、鑷子；

3.培養(yǎng)基和試劑

3.1 3%氯化鈉堿性蛋白胨水:見附錄A中A.1。

3.2 硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖(TCBS)瓊脂:見附錄A中A2。

3.3 3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂:見附錄A中A.3。

3.4 3%氯化鈉三糖鐵瓊脂:見附錄A中A4。

3.5 嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基:見附錄A中A.5。

3.6 3%氯化鈉甘露醇試驗(yàn)培養(yǎng)基:見附錄A中A6。

3.7 3%氯化鈉賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基:見附錄A中A.7。

3.8 3%氯化鈉MR-VP培養(yǎng)基:見附錄A中A8。

3.9 3%氯化鈉溶液:見附錄A中A9。

3.10 我妻氏血瓊脂:見附錄A中A.10。

3.11 氧化酶試劑:見附錄A中A.11。

3.12 革蘭氏染色液:見附錄A中A.12。

3.13 ONPG試劑:見附錄A中A.13。

3.14 Voges-Proskauer(V-P)試劑:見附錄A中A.14。

3.15 弧菌顯色培養(yǎng)基。

3.16 生化鑒定試劑盒。

4.檢驗(yàn)程序

副溶血性弧菌檢驗(yàn)程序見圖1。

5.操作步驟

5.1 樣品制備

5.1.1 非冷凍樣品采集后應(yīng)立即置7℃～10℃冰箱保存,盡可能及早檢驗(yàn);冷凍樣品應(yīng)在45℃以下不超過15min或在2℃～5℃不超過18h解凍。

5.1.2 魚類和頭足類動(dòng)物取表面組織、腸或鰓。貝類取全部?jī)?nèi)容物,包括貝肉和體液;甲殼類取整個(gè)動(dòng)物,或者動(dòng)物的中心部分,包括腸和鰓。如為帶殼貝類或甲殼類,則應(yīng)先在自來水中洗刷外殼并甩干表面水分,然后以無菌操作打開外殼,按上述要求取相應(yīng)部分。

5.1.3 以無菌操作取樣品25g(mL),加入3%氯化鈉堿性蛋白胨水225mL,用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min均質(zhì)lmin,或拍擊式均質(zhì)器拍擊2min,制備成1:10的樣品勻液。如無均質(zhì)器,則將樣品放入無菌乳缽,225mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水中取少量稀釋液加入無菌乳缽,樣品磨碎后放入500mL無菌錐形瓶,再用少量稀釋液沖洗乳缽中的殘留樣品1~2次,洗液放入錐形瓶,*后將剩余稀釋液全部放入錐形瓶,充分振蕩,制備1:10的樣品勻液。

5.2 增菌

5.2.1 定性檢測(cè)

將5.13制備的1:10樣品勻液于36℃±1℃培養(yǎng)8h～18h。

5.2.2 定量檢測(cè)

5.2.2.1 用無菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL,注入含有9mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi),振搖試管混勻,制備1:100的樣品勻液。

5.2.2.2 另取lm無菌吸管,按5.2.2.1操作程序,依次制備10倍系列稀釋樣品勻液,每遞增稀釋次,換用一支1mL無菌吸管。

5.2.2.3 根據(jù)對(duì)檢樣污染情況的估計(jì),選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度,每個(gè)稀釋度接種3支含有9mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管,每管接種1mL。置36℃±l℃恒溫箱內(nèi),培養(yǎng)8h～18h。

5.3 分離

5.3.1 對(duì)所有顯示生長(zhǎng)的增菌液,用接種環(huán)在距離液面以下1cm內(nèi)沾取一環(huán)增菌液,于TCBS平板或弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離。一支試管劃線一塊平板。于36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。

5.3.2 典型的副溶血性弧菌在TCBS上呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落,用接種環(huán)輕觸,有類似口香糖的質(zhì)感,直徑2mm~3mm。從培養(yǎng)箱取岀T℃BS平板后,應(yīng)盡快(不超過lh)挑取菌落或標(biāo)記要挑取的菌落。典型的副溶血性弧菌在弧菌顯色培養(yǎng)基上的特征按照產(chǎn)品說明進(jìn)行判定。

5.4 純培養(yǎng)

挑取3個(gè)或以上可疑菌落,劃線接種3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板,36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。

5.5 初步鑒定

5.5.1 氧化酶試驗(yàn):挑選純培養(yǎng)的單個(gè)菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn),副溶血性弧菌為氧化酶陽(yáng)性。

5.5.2 涂片鏡檢:將可疑菌落凃片,進(jìn)行革蘭氏染色,鏡檢觀察形態(tài)。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性,呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài),無芽胞,有鞭毛。

5.5.3 挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落,轉(zhuǎn)種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層,36℃C±1℃培養(yǎng)24h觀察結(jié)果。副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑,無氣泡,斜面顏色不變或紅色加深,有動(dòng)力。

5.5.4 嗜鹽性試驗(yàn):挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落,分別接種0%、6%、8%和10%不同氯化鈉濃度的胰胨水,36℃±1℃培養(yǎng)24h,觀察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng),在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰胨水中生長(zhǎng)旺盛。

5.6 確定鑒定

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